病理染色常見問題

病理染色是我們在臨床診斷以及科研實驗中最常用到的一種診斷方式，其中較為常用的技術手段會有石蠟切片以及染色液染色。只有將各個部分都保質保量地完成制作后，才可以得到理想中的病理染色切片，從而獲得精準的診斷結果以及進一步的實驗數據。但是我們在實驗中，病理切片的質量總會因為各種情況難保出現參差不齊的情況，所以，我們搜集各類相關文獻，根據實驗經驗，給大家整理歸納出了石蠟切片以及染色液染色中會出現的一些常見問題，并且按照每一種出現的情況來進行深入的原因討論，尋求針對的解決方案。

由于實驗中導致結果出現誤差的原因多種多樣，我們給出的問題出現原因以及處理辦法僅供參考，具體情況同樣需要根據實際情況進行判斷。

l石蠟切片

常見問題誘因及解決方案

1、切片出現疊加褶皺：此類情況主要分為兩種，一種是切片時出現問題，譬如組織相對較硬，其中含有鈣化組織，或者是切片時刀頭不夠鋒利，從而導致褶皺的產生；蠟塊未完全冷卻時質地較軟，切片時依舊容易出現褶皺。另一種情況是在漂片時水溫不夠，切下的組織切片在漂洗時無法完全展開，也會導致褶皺的形成。

解決方案：刀頭不夠鋒利需要重新更換刀片，漂片的水溫一般需要需要比石蠟的熔點更低10℃，也需要調節漂片時間，可以讓切片完整舒展。如果是組織中原先就會出現部分鈣化等，則是難以避免

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2、切片出現分散破裂：此類情況主要分為兩種，一種是在漂片時水溫偏高，從而導致病理切片散開以至于進一步破裂；另一種情況是由于切片組織中本身脂肪含量偏高，脫水時未完全，尤其是在溫水中，脂肪更加容易散開。

解決方案：需要及時調整漂片時的水溫，讓水溫可以適合切片漂開展平，但又不會過熱導致擴大破裂，相對的在切片中脂肪組織含量較多時，需要縮短漂片的時間，如果切片極易破裂，也可以為了保證組織完整性從而不漂水。

3、切片出現明顯刀痕：此類情況主要是因為在進行組織切片時組織中含有質地偏硬的成分，從而導致了切片刀崩出缺口，進而鏡下觀察組織切片中會出現類似于長條道路狀的缺損紋路。

解決方案：此類情況出現大多需要重新更換刀位，同樣的如果是組織中出現一些鈣化的病灶以及一些淋巴結組織，這些刀痕就會變得相對無法避免，如果在不影響染色觀察以及病理診斷的情況下，可以適當包容。

4、切片出現劃痕空洞：此類情況主要是由于在對于組織切割的時候速度過快，未完全對準，導致切片的橫截面不平整，顯微鏡下觀察會出現一些或大或小的組織空洞。

解決方案：在組織切片切割時需要控制進刀的幅度，粗修時建議對于厚度設置為10μm，精修的時候再調整使得蠟塊切面光滑，這樣可以減少空缺孔洞以及小白點和毛糙的出現。

5、切片出現缺失遺漏：此類情況主要分為兩種，一種是在包埋盒中對組織進行包埋時沒有將組織完全按平，這樣就會導致在切片時沒有切到最大的切面，另一種情況就是在對于組織進行取樣時沒有平整取樣，同樣會導致切片出現缺失遺漏，進而影響下一步的實驗。

解決方案：組織處理各個步驟需要盡可能規范操作，組織取材時需要切面平整，組織包埋時需要將每一塊組織都要盡可能按平，每一次進刀時需要觀察蠟塊有沒有暴露出最大的切面，如果效果達不到理想情況，可以對組織重新進行一次包埋。

6、切片出現明顯跳片：此類情況主要是因為樣本組織在蠟塊包埋時有多余蠟塊，導致整個包埋盒與組織連接時不夠緊密，其中產生部分空心情況，從而導致在染色后悔出現不同過深或過淺區域。

解決方案：在出現此類情況需要首先檢查切片儀器是否有完全卡緊，同時也需要檢查切片機刀架是否錯位，如果是因為包埋時未到位導致不牢固甚至是空心的蠟塊，需要重新進行組織包埋。遇到組織比較硬的情況需要適當降低轉速，讓蠟塊適當的回溫后再重新切片。

7、切片出現裂紋碎紋：此類情況一般會出現在樣本組織是器官內膜以及一些淋巴組織中。導致該情況發生的原因會集中體現在蠟塊切片的溫度低于預期溫度，從而導致組織會相對脆化，切片時沒有控制好速度，切片過快，也會導致切片碎裂。

解決方案：切片時將操作臺溫度調節至0℃進行切片，同時降低切片的速度，可有效減少出現裂紋碎紋的情況，如果條件允許，同樣可以使用0℃的冰塊作為蠟塊的冷卻媒介，也可以有效減少此類情況發生。

8、切片出現發白難切：此類情況是因為組織沒有脫水完全，或者說是脫水狀況不好，從而導致石蠟沒有全部沁入組織內部，所以在下一步切片時會因為沒有石蠟作為支撐物導致切片困難。

解決方案：此類情況出現首先要考慮的就是組織的新鮮程度，我們推薦組織在離體半小時內就需要切開進行固定，固定時間根據標本大小控制在8-16h之間，建議標本體積最好不超過1cm3，具體脫水情況可以根據實驗自行確定。

9、切片出現透水反滲：此類情況主要表現在蠟塊放置時間超過一定時間就會出現切面膨脹，表面泛白，導致切片報廢�？赡苁怯捎诮M織脫水時不完全，會有部分水進行反滲。

解決方案：此類情況大多數是因為蠟塊在融化的冰面上放置過久，可以在切片前幾分鐘再將蠟塊放置在冰面上進行冷卻，可以極大程度避免該情況發生。

10、切片出現蠟塊開裂：此類情況主要是由于蠟塊在降溫冷卻時溫度下降過快，內部石蠟其實還未完全冷卻，在這種情況下直接就把模塊撬開的話，就會導致蠟塊開裂。

解決方案：需要從兩點來分析解決問題，第一是檢查石蠟品質問題，檢查是品質問題需要更換產品，第二是石蠟冷卻時不要直接快速降溫，盡量讓石蠟自然冷卻并且完全凝固后再進一步分離，可以有效減少此類情況發生。

本次整理歸納了石蠟切片的常見的10種問題，相對來說每一種問題出現的次數并不一致，有些會時長出現，有些出現的次數并不是很多，但是這10種問題對于科研中研究病理切片以及醫院中直接進行臨床診斷會有直接的影響，我們搜集整理的此類問題的解決方案希望能夠給大家一些幫助，下一期我們會給大家帶來基礎染色液的常見問題總結與解決方案。